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賽默飛色譜柱的使用過程中柱壓通常會出現(xiàn)兩種升高的形式:
1、隨著使用時間的延長色譜柱柱壓慢慢上升,這是正常的;
2、使用過程中(流動相和溫度沒有改變的條件下)色譜柱壓力突然升高很多。這種壓力突然升高的現(xiàn)象,通常是由工作人員操作不當引起的。
原因有三點:
1、樣品太臟,使用前沒有過濾,導致柱篩板堵塞;
2、樣品含有的雜質(zhì)在流動相中的溶解性不是很好,與流動相混合后析出,導致柱塞板堵塞;
3、使用緩沖鹽,處理錯誤,緩沖鹽在賽默飛色譜柱中析出,堵塞塞板和鍵合相顆粒之間的孔隙。
解決辦法對于第二種,即柱壓突然升高的情況,通常有以下幾種解決辦法:
1、將色譜柱反接,用含水比例較大的流動相進行沖洗。
2、色譜柱進樣一端的篩板取下,分別放在水中和甲醇中超聲或更換新的柱篩板。如果柱效沒變,但柱壓仍然較高,則應考慮進樣端填料受污染的問題,因此除了取下進樣端篩板超聲外,還需要挖掉進樣端的部分填料,挖去填料之前先檢查一下填料的顏色,如果填料的顏色發(fā)生了變化,則應該挖掉直到見到白色的填料為止。
挖掉后賽默飛色譜柱將出現(xiàn)一個缺口,填補缺口的填料可以從另一支相同品牌、相同型號的報廢色譜柱的出口端獲得,填料用有機溶劑如甲醇等調(diào)成糊狀裝入缺口處,壓緊刮平,再裝上篩板。